Pomysł na utworzenie Route 66 narodził się w stanie Oklahoma na początku lat dwudziestych dzięki boomowi motoryzacyjnemu, który doprowadził do konieczności rozbudowy i poprawy połączeń drogowych. Opracowano więc plan połączenia istniejących dróg stanowych w jedną długą autostradę krajową, która zapewniałaby krótszą i szybszą drogę przez cały kraj. Głównymi wykonawcami połączenia Chicago z Los Angeles byli przedsiębiorcy Avery Cyrus z Tulsy w stanie Oklahoma i John Woodruff z Springfiels w stanie Missouri.
Po otwarciu drogi niewielu ludzi wiedziało o jej istnieniu i w związku z tym członkowie organizacji “US 66 Highway Association” (członkowie ośmiu stanów, przez które przebiegała autostrada) musieli ruszyć z programem reklamowym mającym na celu promowanie nowej autostrady. Przygotowano przewodniki, pocztówki, a także mapy, których celem było rozpowszechnienie informacji o nowej drodze oraz przyciągnięcia jak najwięcej Amerykanów podróżujących ze Wschodu na Zachód. Program reklamowy promujący Route 66 sprawił, że na drodze tworzył się coraz to większy ruch a ludzie zaczęli inwestować w swoje biznesy i otwierać stacje benzynowe z bistro barami.
Pierwszy poważny ruch na drodze miał miejsce w czasie Wielkiego Kryzysu, który rozpoczął się w październiku 1929 roku i był jednym z najtrudniejszych okresów w historii Ameryki. Okres załamania się gospodarki, który trwał do początku lat 40 przyczynił się do ogromnego bezrobocia i pozbawił wiele rodzin bez środków do życia. Zmagając się z trudnościami ekonomicznymi wielu Amerykanów opuściło swoje rodzinne miasta i ruszyło w podróż do bogatszych części Ameryki, w celu znalezienia pracy oraz lepszego bytu. Droga 66 była wtedy główną drogą migracji między stanami USA.
Innym katastrofalnym wydarzeniem, które przyczyniło się do masowej migracji Amerykanów Drogą 66 był tzw. Dust Bowl, okres susz i burz piaskowych na preriach Kanady i Stanów Zjednoczonych, który doprowadził do wyschnięcia ziemi i spowodował, że rolnicy stanów Oklahoma, Nebraska, Kansas, Teksas, Nowy Meksyk stracili wszystkie swoje plony a rolnictwo stało się wręcz niemożliwe. Z powodu utraty zbiorów ludzie stracili swój dotychczasowy sposób zarabiania pieniędzy i zmuszeni byli do emigracji Drogą 66 najczęściej w strony Kalifornii.
Chociaż gospodarka i obywatele Ameryki byli pod dużym wpływem obydwu kryzysów, Route 66 przeżywała w tym czasie swój rozkwit. Ruch na Route 66 amerykańskich rodzin kierujących się najczęściej w strony Kalifornii był postrzegany przez wielu jako szansa dobrze prosperującego biznesu co z czasem zaowocowało tym, że wzdłuż drogi zaczęło powstawać jeszcze więcej stacji benzynowych, restauracji oraz sklepów. Przez długi czas Autostrada utrzymywała przy życiu wiele małych miasteczek a dla amerykańskich migrantów Route 66 stała się drogą marzeń, możliwości i nadziei na lepsze życie.
Po przyłączeniu się 8 grudnia 1941 roku Stanów Zjednoczonych do II Wojny Światowej Route 66 stała się niezbędna dla ruchu wojskowego i była jedną z ważniejszych tras transportu sił zbrojnych zarówno wojsk, jak i materiałów.
Po wojnie, która zakończyła się w 1945 roku, Droga 66 ponownie była niezastąpioną trasą dla żołnierzy, lotników i marynarzy, którzy wracali do swoich domów, a powojenny rozrój gospodarki sprawił, że Amerykanie zaczęli się dorabiać i mieli więcej środków finansowych, które mogli przeznaczyć na kupno samochodów, zaciągnięcie kredytu na dom, a także podróże, które wcześniej przed wojną nie były tak popularne. Rozwijająca się turystyka i chęć podróżowania Amerykanów po własnym kraju sprawiło, że przy autostradzie zaczęły pojawiać się motele oraz garaże samochodowe.
Niestety to, co miało ogromny wpływ na rozrój Drogi 66 jednocześnie przyczyniło się do jej upadku. Powojenna popularność Route 66 i ogromny ruch samochodowy spowodował, że stan drogi zaczął się bardzo pogarszać. Zniszczona, przestarzała i podziurawiona nawierzchnia Route 66 stała się prawdziwą ruiną i nie nadawała się do dalszego użytku.
Kiedy w roku 1956 prezydent Eisenhower uchwalił ustawę o budowie autostrad międzystanowych upadek Route 66 był tylko kwestią czasu. W ciągu następnych 25 lat coraz więcej odcinków Drogi 66 było stopniowo omijanych, ponieważ ukończono budowę nowoczesnych autostrad międzystanowych. Po ukończeniu ostatnich odcinków nowej i nowoczesnej autostrady międzystanowej o nazwie Interstate 40 Route 66 zaczęła być uważana za zbędną i 27 czerwca 1985 została oficjalnie usunięta z Systemu Drogowego Stanów Zjednoczonych.